Qubit 4.0 操作流程

準備工作

開機預熱

連接電源，開機后儀器自動預熱（約10分鐘），預熱完成屏幕顯示主菜單。

試劑準備

根據(jù)檢測物選擇試劑盒（如DNA HS, RNA HS, Protein等），將試劑置于室溫解凍（約5分鐘）。

關(guān)鍵步驟 ：按比例混合熒光染料與緩沖液（例如：DNA HS試劑按1:200比例混合），渦旋混勻后避光保存。

樣本檢測步驟

創(chuàng)建實驗程序

主菜單選擇檢測類型（如"dsDNA HS"）→ 選擇標準曲線模式（新建或調(diào)用歷史曲線）。

標準品制備

準備2個標準管（#1低濃度、#2高濃度）：

取190μL工作液 + 10μL標準品，渦旋混勻（避免氣泡 ）。

樣本制備

取198μL工作液 + 2μL待測樣本（確保加樣精準 ），渦旋混勻（同標準品）。

檢測操作

打開檢測倉 → 放入標準管和樣本管 → 關(guān)閉倉門。

按"Start Run"開始檢測（約3秒/樣本），儀器自動讀取濃度。

結(jié)果處理

屏幕顯示濃度（如超出范圍需稀釋重測）→ 可導出數(shù)據(jù)至U盤（CSV格式）。

清潔與關(guān)機

取出所有檢測管，用無絨布擦拭檢測倉。

長按電源鍵關(guān)機，斷開電源。

使用場所及典型應用

核心適用場景

分子生物學實驗室

低濃度核酸定量 ：如NGS文庫（Illumina/Ion Torrent）、微量DNA/RNA樣本（cfDNA、單細胞樣本）、PCR產(chǎn)物純化后濃度驗證。

優(yōu)勢 ：檢測下限低至0.005 ng/μL（DNA HS），遠優(yōu)于分光光度法（Nanodrop）。

蛋白質(zhì)研究

微量蛋白定量 ：使用Qubit Protein Assay試劑盒，檢測范圍0.04–5 μg（靈敏度高于BCA法）。

質(zhì)量控制環(huán)節(jié)

樣本制備流程關(guān)鍵點監(jiān)控（如提取后濃度確認、文庫構(gòu)建前質(zhì)檢）。

不適用場景

高濃度樣本 ：如濃度>100 ng/μL（需稀釋或改用Broad Range試劑盒）。

含抑制劑樣本 ：強酸/堿、去污劑可能干擾熒光信號（需純化樣本）。

快速粗定量 ：對精度要求不高時，Nanodrop更快捷。

關(guān)鍵注意事項

避免污染

使用無核酸酶/無RNase離心管，戴手套操作。

控制氣泡：渦旋后靜置30秒，確保管內(nèi)無氣泡（氣泡會干擾光路）。

試劑穩(wěn)定性：混合后的工作液需4℃避光保存，1周內(nèi)用完 （過期試劑導致結(jié)果偏低）。

校準要求：每2年返廠校準一次，或使用標準品驗證儀器準確性。

動態(tài)范圍限制：不同試劑盒檢測范圍不同，超范圍需更換試劑盒或稀釋樣本（如DNA HS：0.005–100 ng/μL）。

常見問題解決：

Qubit 4.0憑借其高靈敏度、抗污染物干擾能力 ，成為微量核酸/蛋白定量的金標準，尤其適用于下一代測序、單細胞分析、低豐度樣本檢測 等場景。精確操作流程與試劑規(guī)范是確保數(shù)據(jù)可靠性的核心。日常使用中需定期校準儀器、避免試劑污染，并在超出檢測范圍時及時調(diào)整策略